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科研體系

致力于生命研究、生物檢測技術(shù)的多領(lǐng)域開(kāi)發(fā)

蛋白純化概述

蛋白純化(protein purification)是從組織、細胞或者蛋白混合物中分離提取特定的目的蛋白組份的過(guò)程。
蛋白純化既要使得分離的蛋白具有較高純度,同時(shí)又要保持蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性。因此,需要根據不同的蛋白性質(zhì)設計一種或者多種組合提純方案。 蛋白的純化主要策略是利用不同蛋白質(zhì)之間的相似性與差異性。依據蛋白之間的相似性可以去除非蛋白物質(zhì),再根據蛋白質(zhì)的差異性將目的蛋白分離出來(lái)。特別是基因工程技術(shù)發(fā)展迅速,許多蛋白雖然通過(guò)基因重組方法可以實(shí)現表達,但蛋白純化的水平直接影響蛋白的純度和活性的高低,因此,蛋白純化仍是現代生物技術(shù)一個(gè)重大課題。

目的

蛋白分離純化所得到的蛋白一方面對于深入研究蛋白質(zhì)的結構與功能至關(guān)重要,另一方面,蛋白的分離純化也直接影響蛋白的應用效果。因此,蛋白純化對于生物科學(xué)研究和應用有著(zhù)重要作用,蛋白分離與純化技術(shù)也是生物產(chǎn)業(yè)中的核心技術(shù)。

方法

蛋白純化的原則是以合理的效率、速度、收率和純度,分離目的蛋白,同時(shí)仍保留其生物學(xué)活性和化學(xué)完整性。主要步驟包括選擇實(shí)驗材料,實(shí)驗材料預處理、蛋白提取、蛋白粗分級、蛋白細分級以及蛋白鑒定等過(guò)程。
純化過(guò)程中必須注意:1盡可能減少對蛋白活性的影響,例如避免酸堿度過(guò)高或過(guò)低、高溫和重金屬等因素影響;2. 低溫條件下操作;3. 盡可能使樣品中蛋白質(zhì)的濃度維持在較高水平。

分類(lèi)

根據純化手段的類(lèi)型,可以將蛋白純化分為:
一,沉淀法,包括鹽析沉淀,利用鹽離子破壞蛋白表面水化層,暴露疏水區,繼而發(fā)生沉淀,達到初步純化目的;有機沉淀,利用有機溶劑降低水活度,破壞蛋白表面水化膜,導致蛋白沉淀。沉淀法是溫和的純化方法,但純度不高,可以作為初級純化步驟。
二,透析法,包括透析袋和超濾法。通過(guò)透析和超濾,可以去除小分子雜質(zhì),而且可以置換蛋白基質(zhì)溶液。
三,層析法,包括分子篩凝膠層析、離子交換層析、親和層析(金屬螯合親和層析、蛋白A/G層析、受體蛋白、底物等)、疏水層析、反向層析及高效液相法等。通常需要兩種層析方法組合使用,才能達到較好效果,比如親和層析與離子交換層析組合。
除以上方法外,還有其它多種純化手段,例如密度梯度離心法適合于高純度蛋白的制備,但需要較高的實(shí)驗條件;蛋白結晶則適合于生物結構學(xué)分析,如用X衍射對蛋白晶體進(jìn)行研究。

  • 技術(shù)特點(diǎn)

    我公司目前已建立了成熟完善的蛋白純化平臺?,F擁有GE公司AKTA系列蛋白純化儀、各類(lèi)凝膠層析、親和層析、離子交換層析體系,以及蛋白濃度、純度、活性鑒定體系。我公司可根據不同目的蛋白特征針對性設計純化線(xiàn)路和方案,實(shí)現快速、高效對天然組織細胞和重組蛋白產(chǎn)物進(jìn)行蛋白純化。

  • 咨詢(xún)電話(huà):0755-26650513

  • 郵箱:sale@biocbd.com

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